pNL3.2.CMV Vector

Den konstitutivt uttrykkende pNL3.2.CMV-vektoren produserer kontinuerlig NanoLuc-reporteren fusjonert til en PEST-destabiliseringsdomene (NlucP). NlucP-fusjonsproteinet akkumuleres naturlig på lave intracellulære nivåer på grunn av konstitutiv proteasomal nedbrytning, og fungerer derfor som en negativ kontroll for eksperimenter konfigurert for å måle regulerte endringer i NanoLuc-luciferaseuttrykksnivåer (f.eks. NanoLuc-fusjonsvektorer). Denne vektoren koder også for et hygromycinresistensgen for utvalg i pattedyrceller. NanoLuc (Nluc) luciferase er et lite enzym (19,1 kDa) utviklet for optimal ytelse som en luminescerende reporter. Enzymet er om lag 100 ganger lysere enn enten ildflue (Photinus pyralis) eller Renilla reniformis luciferase ved hjelp av et nytt substrat, furimazin, for å produsere høyintensitetsglødende luminescens. Den luminescerende reaksjonen er ATP-uavhengig og designet for å undertrykke bakgrunnslysomens for maksimal assaysensitivitet.