Carboxy Flexi Enzyme Blend (SgfI & EcoICRI)

Carboxy Flexi Enzyme Blend (SgfI & EcoICRI) er nødvendig for å klippe akseptor Flexi-vektorer som inneholder en karboksyl-terminal peptid eller protein tag. Den donore vektoren (dvs. klonen som inneholder den protein-kodende regionen av interesse) klippes med SgfI og PmeI i en separat reaksjon. De to restriksjonsnedbrytingene blir varmeinaktivert og deretter kombinert med ligase for å overføre den protein-kodende regionen til akseptorvektoren, og dermed legge til karboksyl-terminal tag til proteinet av interesse. Det ligerede produktet inneholder ikke lenger EcoICRI-nettstedet til akseptorvektoren eller PmeI-nettstedet til protein-koderegionen, ettersom disse to blunt-end-kuttersmålene ikke gjenskapes i ligeringen. Siden akseptor Flexi-vektoren inneholder et dødelig barnase-gen, er komplett fordøyelse med Carboxy Flexi Enzyme Blend ikke nødvendig for god overføringshastighet av protein-koderegionen fra donor Flexi-vektoren.