Slik kartlegger laboratoriet allergisk sensitivitet uten provokasjonsforsøk
Basofil aktiveringstest (BAT) kartlegger allergi og allergisk sensitivitet ved å undersøke pasientens eget blod, uten at pasienten eksponeres for allergenet. Allergenet tilsettes i røret på laboratoriet, og basofilers aktiveringsgrad avleses med flowcytometri. Ferdigproduserte rør med frysетørkede reagenser fra Beckman Coulter har gjort metoden tilgjengelig for et langt bredere spekter av laboratorier enn tidligere.
Hva er basofil aktiveringstest?
BAT er en funksjonell analyse der basofiler, en type hvite blodceller, eksponeres for et allergen direkte i fullblod. Aktiveringsgraden måles ved hjelp av flowcytometri, der overflatemarkørene CD63 og CD203c brukes som indikatorer. Jo sterkere basofil aktivering, desto høyere allergisk sensitivitet hos pasienten. Analysen skiller mellom pasienter som er sensibiliserte, og de som faktisk reagerer klinisk.
Blodprøven tas én gang. Selve allergeneksponeringen skjer i røret på laboratoriet, ikke i pasienten. Dette er særlig verdifullt ved testing av alvorlige allergier som peanøtt, tre- og skallfrukter eller insektgifter, der tradisjonelle provokasjonsforsøk innebærer reell risiko.
Frysеtørkede reagenser løser et kjent problem
Tradisjonell BAT har vært krevende å implementere bredt. Reagenser på flaske har begrenset holdbarhet, krever kjølig lagring og varierer fra lot til lot. For allergilaboratorier som tester pasienter én gang i året til oppfølging, er det ikke uvanlig at reagensene har gått ut på dato mellom hvert besøk. Lot-til-lot-variasjon gjør det dessuten vanskelig å sammenligne resultater over tid.
Beckman Coulters DURAClone-teknologi frysеtørker antistoffer og allergener direkte i røret. Rørene lagres og transporteres ved romtemperatur. Preparerte prøver er dokumentert stabile i opptil fem dager, noe som gjør det mulig å klargjøre prøver ved et lokalt sykehus og sende dem til referanselaboratorium for analyse uten tap av resultatkvalitet.
Merk
FARE (Food Allergy Research & Education), den ledende amerikanske ideelle organisasjonen for matallergiforskning, kåret Beckman Coulters neste generasjons BAT-teknologi til det mest lovende bidraget for tilgjengelig og brukervennlig allergiutredning i 2022.
Slik fungerer analysearbeidsflyten
Protokollen krever kun fire pipetteringstrinn og ingen sentrifugering. Hele arbeidsflyten kan implementeres av laboratorier uten spesialisert flowcytometrikompetanse.
Blodprøve tilsettes røret
50 µl heparinisert fullblod tilsettes direkte i det ferdigproduserte DURAClone-røret, sammen med 50 µl PBS (eller kalsiumaktivasjonsbufer ved EDTA-blod). Ingen sentrifugering nødvendig.
Vortex og inkubasjon
Røret vortexes i 5–8 sekunder og inkuberes ved 37 °C i 15–30 minutter, lystett. Deretter tilsettes 250 µl lysisbuffer og røret vortexes igjen i 1–2 sekunder.
Avventing og PBS-tilsetting
Etter 10 minutter ved romtemperatur (lystett) tilsettes 250 µl PBS og røret vortexes i 1–2 sekunder. Prøven er klar for analyse.
Flowcytometrianalyse
Prøven kjøres på flowcytometeret, eller lagres i opptil fem dager ved romtemperatur eller 2–8 °C. Basofiler gates som SSlowCD45+CD3–HLA-DR–CD123+ celler. Aktiveringsgraden avleses ved CD203c og CD63 som doble aktiveringsmarkører.
Tilpasset ditt laboratoriums behov
Rørene leveres i skreddersydde poucher som sykehuset eller laboratoriet selv designer. Det er to vanlige tilnærminger:
Brede allergipaneler kartlegger hvilke allergener pasienten reagerer på. En pouch inneholder da rør for peanøtt, mandel, eple, egg og andre aktuelle allergener, kombinert med positiv og negativ kontroll. Dette er egnet for initial utredning.
Dosesvarskurver kartlegger hvor sensitiv pasienten er for ett bestemt allergen. Det samme allergenet tilsettes i stigende konsentrasjoner, for eksempel 0,01×, 0,1×, 1× og 10× pollen. Dette er særlig nyttig ved oppfølging av immunterapi over tid, der man ønsker å se om terskelen for aktivering endrer seg.
Allergenekstrakter leveres i samarbeid med InBio, en internasjonalt anerkjent produsent av rensede matallergener. Laboratoriet kan også bidra med egne ekstrakter som formuleres inn i rørene. BAT-rørene er en Custom Design Service (CDS) tilgjengelig globalt, bestilt uten eget artikkelnummer.
Vanlige spørsmål om BAT
Hva er basofil aktiveringstest (BAT)?
Basofil aktiveringstest (BAT) er en flowcytometribasert analyse der basofiler i pasientens fullblod eksponeres for allergener i rør på laboratoriet. Aktiveringsgraden måles via overflatemarkørene CD63 og CD203c og korrelerer med pasientens allergiske sensitivitet. Testen er et trygt alternativ til orale provokasjonsforsøk, der pasienten ikke trenger å eksponeres direkte.
Hvilke allergener kan inkluderes i rørene?
Rørene kan tilpasses med et bredt utvalg allergener, inkludert peanøtt, tre- og skallfrukter, egg, melk, pollen og insektgifter. Allergenekstrakter leveres via InBio og andre ledende leverandører. Laboratoriet kan også bruke egne ekstrakter som formuleres inn i rørene.
Hva er fordelen med frysеtørkede reagenser fremfor flytende?
Frysеtørkede reagenser har vesentlig lengre holdbarhet, er stabile ved romtemperatur og eliminerer lot-til-lot-variasjoner. For laboratorier som tester allergipasientene kun én gang i året er dette særlig viktig. Med flytende reagenser er det en reell risiko for at produktet er utgått på dato, eller at lot-variasjoner påvirker sammenlignbarhet over tid.
Kan preparerte BAT-prøver sendes til et referanselaboratorium?
Ja. Preparerte prøver er stabile i opptil fem dager ved romtemperatur eller 2–8 °C. Et lokalt sykehus kan klargjøre prøvene og sende dem til et referanselaboratorium for flowcytometrianalyse uten behov for spesialisert kompetanse lokalt.
Krever BAT et spesielt flowcytometer?
Nei. Arbeidsflyten er kompatibel med ethvert flowcytometer. Det er ikke behov for kompenseringsjustering, og sentrifugering er ikke nødvendig. Protokollen er validert på Beckman Coulters Navios-plattform, men fungerer på andre instrumenter.
Hva er minimumsbestillingen, og hvordan bestiller vi?
Minimumsbestillingen er 100 rør, avhengig av allergenvalg og antistoffpanel. BAT-rørene bestilles som Custom Design Service (CDS) globalt, uten eget artikkelnummer. Ta kontakt med NMAS for veiledning og tilbud.